龙眼己糖激酶基因的克隆及原核表达

• 作者: 吴振先 帅良 李静 韩冬梅
• 来源期刊: 华南农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 龙眼 己糖激酶 基因克隆 荧光定量PCR 原核表达
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 页码范围: 91-97
• 页数: 7页
• 分类号: S667.2
• 字数: 5544字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7671/j.issn.1001-411X.2015.03.016

摘要

[目的]克隆龙眼Dimocarpus longan己糖激酶(Hexokinase,HXK)基因,并对其进行生物信息学分析及原核表达分析.[方法]以龙眼总RNA为模板,采用RT-PCR结合RACE法获得基因全长cDNA序列,构建pET-32a-DlHXK原核表达载体,转化到大肠埃希菌Escherichia coli Rosetta(DE3)中诱导表达.[结果和结论]成功克隆龙眼己糖激酶基因的cDNA全长序列,命名为DlHXK,登录号为KF776906.1.龙眼DlHXK序列全长2 101 bp,包括1个1 488 bp的开放阅读框,预测编码495个氨基酸;进化树和相似性分析发现,该基因与温州蜜柑Citrus unshiu的相似性最高,达到了82％;荧光定量表达分析表明,DlHXK基因随着果实的发育成熟表达量逐渐上升;经IPTG诱导和SDS-PAGE检测,所构建的原核表达载体表达的融合蛋白与预期蛋白大小相吻合.由此可见,利用RT-PCR结合RACE方法成功克隆了龙眼的己糖激酶基因,构建原核表达载体,并在大肠埃希菌Rosetta (DE3)中获得高效表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	韩冬梅	广东省农业科学院果树研究所	41	512	12.0	21.0
2	吴振先	华南农业大学园艺学院	32	600	11.0	24.0
3	李静	华南农业大学园艺学院	27	152	7.0	11.0
4	帅良	华南农业大学园艺学院	5	33	3.0	5.0