表达禽流感病毒HA蛋白及传染性法氏囊病毒VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒的构建

• 作者: 唐猛 姜永萍 柳金雄 潘俊慧 王笑梅 陈化兰 陈普成 高立
• 来源期刊: 中国预防兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 重组粘粒 重组火鸡疱疹病毒 三联苗
• 年，卷（期）: 2017,（11）
• 所属期刊栏目: 病原生物学
• 页码范围: 865-869
• 页数: 5页
• 分类号: S852.65
• 字数: 3442字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-0589.201703038

摘要

为构建同时表达禽流感病毒(AIV) HA蛋白及传染性法氏囊病毒(IBDV) VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒(rHVT),本研究以本实验室构建的连续覆盖火鸡疱疹病毒(HVT)全基因组的5个重组粘粒(pFosA、pFosB、pFosC、pFosD和pFosE)为基础,利用猪捷申病毒2A蛋白的编码序列,将HA基因和VP2基因串联,并克隆于pCAGGs载体中,构建重组质粒pCA-HA-2A-VP2.利用Gateway LR克隆技术,将重组质粒中的HA-2A-VP2的表达盒(Pec-HA-2A-VP2-POLYA)插入到pFosC粘粒中HVT片段的复制非必需区HVT053与HVT054基因之间,构建重组粘粒pFosC-5354-HA-VP2.将pFosA、pFosB、pFosD、pFosE和pFosC-5354-HA-VP2 5个重组粘粒共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),制备表达HA蛋白及VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒(rHVT-5354-HA-VP2).将重组病毒在CEF中连续传至20代后,通过PCR、间接免疫荧光和western blot鉴定分析,结果显示HA与VP2基因能够在重组病毒中稳定存在并正确表达;生长动力学结果表明,重组病毒在CEF中的增殖效率与野生型病毒HVT无显著差异.该重组病毒的制备为研制AIV-IBDV-马立克病毒三联苗奠定了基础.