香菇Latcripin-8蛋白的表达、纯化及抗肿瘤活性

• 作者: 张伟 李星云 栾杭琪 沙丽 王晓丽 王钰 邵立群 钟民涛 黄敏
• 来源期刊: 中国微生态学杂志
• 关键词: 香菇C91-3 Latcripin-8基因 原核表达 抗肿瘤
• 年，卷（期）: 2017,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1031-1036
• 页数: 6页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13381/j.cnki.cjm.201709009

摘要

目的 通过生物信息学方法分析Latcripin-8的基因序列、功能域片段,构建重组质粒,表达含Pkinase结构域基因的目的蛋白并研究重组蛋白的抗肿瘤活性.方法 从香菇C91-3菌丝体中提取总RNA,经反转录成cDNA文库.高通量测序获得转录组mRNA,经对比获得目的序列后以RACE技术扩增.经Pfam数据库比对可知其具有Pkinase结构域.设计引物,PCR扩增并与原核表达载体pET32a(+)进行连接,转至E.coli Rosetta-gami (DE3)中进行蛋白诱导表达,经纯化、复性后获得目的蛋白并鉴定.CCK8法检测其对人肺腺癌A549细胞、人胃癌SGC-7901细胞、人肝癌HepG2细胞及人乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制率.结果 蛋白诱导成功且该蛋白对不同种类的肿瘤细胞抑制效果不同,其中对人胃癌SGC-7901细胞的增殖抑制程度最为明显,并表现出时间和浓度依赖性.结论 经Latcripin-8基因诱导表达出的蛋白具有抗肿瘤功效,为进一步深入研究抗肿瘤方面的活性提供了初步条件,有助于肿瘤治疗作用的研究.