小立碗藓GFP-CAD1-PNT182融合基因表达载体的构建

• 作者: 姜山 谭雅芹 闫慧清
• 来源期刊: 西南农业学报
• 学科: 生物学
• 关键词: GFP 高保真酶 载体构建 基因克隆
• 年，卷（期）: 2017,（9）
• 所属期刊栏目: 生理生化
• 页码范围: 1975-1980
• 页数: 6页
• 分类号: Q782
• 字数: 4079字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16213/j.cnki.scjas.2017.9.009

摘要

[目的]为利用绿色荧光蛋白基因(GFP)的表达情况优化聚乙二醇(PEG)介导的小立碗藓原生质体的转化体系及检测.CAD1基因在细胞中的定位,构建小立碗藓GFP-CAD1-PTN182融合基因表达载体.[方法]用高保真酶获得GFP基因,通过双酶切GFP基因和CAD1-PTN182表达载体,将两片段洗脱回收,然后用T4-DNA连接酶将酶切产物在16 ℃条件下过夜连接.将连接产物转化到E.coli DH5α感受态细胞中,通过凝胶成像电泳的方法,挑选阳性克隆进行验证,并经过酶切验证和测序.[结果]序列对比相似度达100％,表明GFP-CAD1-PTN182融合基因表达载体构建成功.[结论]该载体的成功构建,为PEG介导小立碗藓原生质体转化体系的优化提供了便捷的检测手段,同时为进一步研究CAD1基因在细胞中的定位提供了理论依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	姜山	贵州师范大学生命科学学院	28	131	6.0	10.0
2	谭雅芹	贵州师范大学生命科学学院	3	3	1.0	1.0
3	闫慧清	贵州师范大学生命科学学院	11	5	1.0	2.0