hSesn1基因真核表达载体构建及蛋白的表达和定位

• 作者: 付勤 巴根 李妍 杨蕾 沈涛 郭洲洋 郭然 陈之光
• 来源期刊: 医学研究杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: hSesn1 Western blot 绿色荧光蛋白 质粒构建
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 41-44
• 页数: 4页
• 分类号: Q291
• 字数: 2890字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11969/j.issn.1673-548X.2017.06.011

摘要

目的 构建人源的Sesn1真核表达载体同时检测融合蛋白在COS-7细胞系内的表达和定位.方法 提取工具细胞系HeLa的mRNA,进而反转录成为cDNA.聚合酶链反应方法扩增人源Sesn1基因的cDNA全长片段,将其克隆于pEGFP-C1真核表达载体中.进一步将已构建好的重组表达载体进行双酶切以及测序鉴定,继而转染到工具细胞系COS-7中,进行Western blot方法检测.最后应用激光共聚焦扫描显微镜方法来观察pEGFP-hSesn1在COS-7细胞中的定位情况.结果 hSesn1基因cDNA全长片段克隆至pEGFP-C1真核表达载体中,酶切鉴定片段大小为1479bp,测序证实成功.Western blot方法检测出GFP-hSesn1融合蛋白的成功表达,分子质量(Mr)约为80kDa.pEGFP-hSesn1在COS-7于细胞中主要定位在细胞质及核周.结论 成功构建了pEGFP-hSesn1真核表达载体,进而检测到融合蛋白的表达,并且在COS-7细胞中主要定位于核周及细胞质.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	付勤		182	1030	16.0	22.0
2	郭然	中国医科大学附属盛京医院骨科	9	24	2.0	4.0
3	沈涛	中国医科大学附属盛京医院骨科	27	129	5.0	11.0
4	巴根	中国医科大学附属盛京医院骨科	20	78	5.0	8.0
5	杨蕾	中国医科大学附属盛京医院骨科	56	176	8.0	10.0
6	陈之光	中国医科大学附属盛京医院骨科	19	78	4.0	8.0
7	郭洲洋	中国医科大学附属盛京医院骨科	3	0	0.0	0.0