吕氏泰勒虫TlSP基因多态性免疫区在毕赤酵母中的高效分泌表达

• 作者: 关贵全 刘光远 刘军龙 刘志杰 刘爱红 李有全 李禤 殷宏 王锦明 罗建勋 郭鹏飞 韩元
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 吕氏泰勒虫 TlSP基因 毕赤酵母 分泌表达 反应原性
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 135-141
• 页数: 7页
• 分类号: S852.723
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2018.0021

摘要

为研制具有完整抗原性和天然结构的吕氏泰勒虫表面蛋白TlSP(Theileria luwenshuni surface protein),采用RT-PCR方法从吕氏泰勒虫裂殖子总RNA反转录获得TlSP基因的cDNA序列,将其多态性免疫区域克隆至毕赤酵母表达载体pPIC9K,构建重组质粒pPIC9K-TlSP.pPIC9K-TlSP经SalⅠ酶切线性化后,电转化导入毕赤酵母菌株GS115和KM71中,经遗传霉素G-418筛选后得到高拷贝菌株,对PCR鉴定为阳性的菌株进行甲醇诱导表达.对GS115和KM71两种菌株表达重组蛋白TlSP的效果进行评估,并对TlSP的反应原性进行了分析.结果表明,反转录获得的TlSP基因的cDNA序列长为888 bp,其中多态性免疫区域长为552 bp;筛选得到抗遗传霉素G-418 (4.0 mg/mL)的GS115菌株5株,KM71菌株7株,经PCR鉴定为阳性的2种菌株均成功表达了分泌型重组蛋白TlSP,GS115菌株的蛋白表达效果较好;重组蛋白TlSP能与吕氏泰勒虫、尤氏泰勒虫、绵羊泰勒虫及环形泰勒虫阳性血清发生反应,而与巴贝斯虫、绵羊无浆体阳性血清无反应.本研究为深入研究TlSP蛋白在羊泰勒虫病免疫学诊断和亚单位疫苗中的应用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	殷宏	中国农业科学院兰州兽医研究所	72	423	14.0	18.0
2	罗建勋	中国农业科学院兰州兽医研究所	63	365	13.0	17.0
3	李有全	中国农业科学院兰州兽医研究所	28	27	3.0	5.0
4	关贵全	中国农业科学院兰州兽医研究所	33	77	6.0	8.0
5	刘志杰	中国农业科学院兰州兽医研究所	16	4	1.0	2.0
6	刘爱红	中国农业科学院兰州兽医研究所	26	178	8.0	13.0
7	刘光远	中国农业科学院兰州兽医研究所	27	138	8.0	11.0
8	刘军龙	中国农业科学院兰州兽医研究所	15	1	1.0	1.0
9	郭鹏飞	中国农业科学院兰州兽医研究所	3	0	0.0	0.0
10	韩元	中国农业科学院兰州兽医研究所	3	0	0.0	0.0
11	王锦明	中国农业科学院兰州兽医研究所	11	0	0.0	0.0
12	李禤	中国农业科学院兰州兽医研究所	5	0	0.0	0.0