人PD1基因真核表达载体构建与鉴定

• 作者: 康宇佳 杨霄 石金磊 穆宇灵
• 来源期刊: 生物过程
• 学科: 医学
• 关键词: PD1 重组质粒 EGFP WESTERN BLOT 转染
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 页码范围: 55-60
• 页数: 6页
• 分类号: R73

摘要

目的:构建含EGFP标签的人程序性死亡受体(hPD-1)的真核表达载体,为后续基因转移实验奠定基础。方法:PCR扩增hPD-1基因编码框,将PD-1和pEGFP-N1质粒双酶切后进行连接转化,构建重组载体pEGFP-N1-PD-1,酶切重组质粒并测序鉴定,将构建好的重组质粒转染HEK293T细胞,并提取蛋白进行Western blot检测。结果:重组真核表达载体pEGFP-N1-PD-1经限制性内切酶分析,双酶切之后的条带与理论值相符,测序结果未见碱基变异,提取转染后细胞的总蛋白进行Western blot可以检测到目标条带。结论:成功构建了pEGFP-N1-PD-1真核表达载体,并且能够在293T细胞中正常表达,为后续研究PD-1基因的功能奠定基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	石金磊	上海科技大学生命科学与技术学院	4	3	1.0	1.0
2	康宇佳	上海科技大学生命科学与技术学院	4	0	0.0	0.0
3	穆宇灵	上海科技大学生命科学与技术学院	1	0	0.0	0.0
4	杨霄	上海科技大学生命科学与技术学院	1	0	0.0	0.0