人鼻病毒3C蛋白酶在大肠杆菌中的 表达、纯化及活性分析

• 作者: 周瑜 喻婵 徐虎 翟超
• 来源期刊: 湖北大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 人鼻病毒3C蛋白酶 MBP标签 融合表达 木聚糖酶
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 基因的克隆与表达研究专栏
• 页码范围: 18-23
• 页数: 6页
• 分类号: Q786
• 字数: 5038字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2375.2018.01.004

摘要

人鼻病毒3C蛋白酶具有高特异性,且在低温条件下具有较高酶活,目前已被商品化.在大肠杆菌中利用麦芽糖结合蛋白(MBP)作为融合标签可促进人鼻病毒3C蛋白酶的可溶性表达.将人鼻病毒3C蛋白酶的DNA编码序列克隆到pRK792载体上,然后导入到大肠杆菌BL21(DE3),进行诱导表达,获得MBP-LEVLFQGP-6xHis-人鼻病毒3C蛋白酶融合蛋白,随后通过Ni柱亲和纯化获得目的蛋白.用该产物切割纯化的MBP-LEVLFQGP-6xHis-木聚糖酶融合蛋白,可获得木聚糖酶并用底物平板检测其活性.实验结果表明人鼻病毒3C蛋白酶能够在大肠杆菌中表达,并且能特异性地在其底物识别序列进行切割,从而移除MBP标签,获得仅带有6xHis的人鼻病毒3C蛋白酶.该酶可以特异性地去除木聚糖酶融合蛋白中的MBP标签,获得有活性的木聚糖酶.利用MBP标签能够促进人鼻病毒3C蛋白酶可溶性表达,且人鼻病毒3C蛋白酶的活性不受影响,有利于一些不稳定的蛋白在低温下的标签去除和纯化.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	周瑜	湖北大学生命科学学院生物资源绿色转化协同创新中心	2	2	1.0	1.0
2	徐虎	湖北大学生命科学学院生物资源绿色转化协同创新中心	1	0	0.0	0.0
3	喻婵	湖北大学生命科学学院生物资源绿色转化协同创新中心	2	0	0.0	0.0
4	翟超	湖北大学生命科学学院生物资源绿色转化协同创新中心	5	22	4.0	4.0