优化合成有机磷水解酶opd p基因 在毕赤酵母中的表达

• 作者: 严红 孙其濛 王颖 马立新 黄灿
• 来源期刊: 湖北大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 毕赤酵母 有机磷水解酶 opd基因 分泌表达
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 基因的克隆与表达研究专栏
• 页码范围: 7-11,23
• 页数: 6页
• 分类号: Q78|Q933
• 字数: 3704字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2375.2018.01.002

摘要

拟验证通过密码子优化有机磷水解酶(opd)基因,和生物砖方法构建opd多拷贝载体,以提高在毕赤酵母中的表达量.将原始的opd基因依照毕赤酵母偏爱密码子设计合成新的有机磷水解酶基因,并在C端添加了6个His-Tag融合蛋白标签.所合成的opd p基因全长1149 bp(base pair).基因克隆入pHBM905BDM毕赤酵母表达型质粒,成功构建重组表达质粒pHBM905BDM-opd p,以及多拷贝表达质粒pHBM905BDM-opd p-2C,pHBM905BDM-opd p-3C,pHBM905BDM-opd p-4C,转化毕赤酵母感受态细胞GS115.实验结果表明,经甲醇诱导后,在AOX1(乙醇氧化酶基因)启动子调控下,获得OPD P蛋白分泌表达,Western Blot检测4个转化的菌株中都表达了目的蛋白,且两拷贝表达量较一拷贝有提高,达到0.2 U/mL.但是随着拷贝数的进一步增加表达量呈现下降的趋势.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	马立新	湖北大学生命科学学院	77	616	14.0	21.0
2	王颖	湖北大学生命科学学院	35	86	5.0	7.0
3	黄灿	湖北大学生命科学学院	3	1	1.0	1.0
4	严红	湖北大学生命科学学院	5	54	3.0	5.0
5	孙其濛	湖北大学生命科学学院	1	1	1.0	1.0