新型R-扁桃酸脱氢酶的基因挖掘及表达鉴定

• 作者: 丁朋举 史红玲 唐存多 姚伦广 许建和 阚云超 马越
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 扁桃酸脱氢酶 基因组挖矿 表达 酶学特性 生物催化
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 30-37
• 页数: 8页
• 分类号: Q819
• 语种: 中文
• DOI: 10.13523/j.cb.20180205

摘要

R-扁桃酸脱氢酶在苯乙酮酸的生物合成中起着关键的作用,挖掘具有高催化活性及稳定性的新型R-扁桃酸脱氢酶具有重要的意义.为了获得理想的R-扁桃酸脱氢酶,采用了基因组挖矿技术从Lactobacillus harbinensis菌株中获得了一个新型的R-扁桃酸脱氢酶LhDMDH,重组LhDMDH的比酶活高达1264.3 U/mg,约为探针的4倍,在已报道的R-扁桃酸脱氢酶中处于领先水平.同时,考察了4个重组酶主要的酶学特性,它们的最适反应温度在25 ～ 30℃,最适反应pH在9.0 ～9.5.动力学参数的结果表明,LhDMDH对底物的Kcat值为30.28 S-1,明显高于其它重组酶.此外,底物谱分析的结果也表明LhDMDH在外消旋扁桃酸的手性拆分及苯乙酮酸的生物合成中更具优势.在R-扁桃酸脱氢酶基因挖掘方面取得了较为理想的结果,为进一步的改造及应用奠定了坚实的基础,也为其它酶的挖掘提供了可资借鉴的经验.