CART免疫疗法中慢病毒拷贝数检测的实验研究

• 作者: 代洋 宋如晦 徐瑶 石伟林
• 来源期刊: 武汉大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: CART免疫治疗 慢病毒拷贝数 TaqMan实时定量技术
• 年，卷（期）: 2018,（2）
• 所属期刊栏目: 技术与方法学研究
• 页码范围: 258-263,304
• 页数: 7页
• 分类号: R392.12
• 语种: 中文
• DOI: 10.14188/j.1671-8852.2017.0260

摘要

目的:利用特异探针检测慢病毒拷贝数,在CART免疫治疗中准确区分携带不同靶点的CART细胞在体内的增殖情况.方法:采用分子克隆技术构建含CD19和CD22 CAR结构的慢病毒重组质粒;通过流式和ELISA技术检测两种CART细胞在体外与Raji共培养时的杀瘤效率;通过TaqMan技术检测293T细胞及病人基因组中的病毒拷贝数.结果:CD19和CD22的慢病毒载体成功构建,并收集具有高滴度的病毒颗粒;体外研究结果显示感染病毒的T细胞(CD19-CART和CD22-CART)分别与Raji共培养组的杀瘤效率和IL6释放水平均显著(P＜0.05)或极显著(P＜0.01)高于对照组,在293T细胞中,转染了病毒与重组质粒组的慢病毒拷贝数均显著高于未转染组(P＜o.05);CD19-CART和CD22-CART序贯回输20 min后,均可在体内检测到102-104个病毒拷贝,到第10天显著上升(P＜0.05),随后变化平稳,且均高于初始回输水平.结论:跟踪监测病毒拷贝数,能确定特定CART细胞在体内的存续时间,为选择合适的治疗时机提供实验依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐瑶	武汉科技大学生命科学与健康学院生物医学研究院	6	8	2.0	2.0
2	代洋	武汉科技大学生命科学与健康学院生物医学研究院	2	2	1.0	1.0
3	石伟林	武汉科技大学生命科学与健康学院生物医学研究院	2	2	1.0	1.0
4	宋如晦	武汉科技大学生命科学与健康学院生物医学研究院	2	3	1.0	1.0