实时定量PCR检测转基因绵羊拷贝数

• 作者: 丁新平 唐红 张宾 张译元 王立民 王聪慧 赵兴旺 赵帅 郭延华
• 来源期刊: 新疆农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 转基因绵羊 实时荧光定量PCR 拷贝数
• 年，卷（期）: 2015,（8）
• 页码范围: 1517-1521
• 页数: 5页
• 分类号: S852.16
• 字数: 3665字
• 语种: 中文
• DOI: 10.6048/j.issn.1001-4330.2015.08.024

摘要

[目的]利用高通量、快速、灵敏的实时荧光定量PCR法,检测转类胰岛素样生长因子1-红色荧光蛋白基因(insulin-like growth factor 1-red fluorescent protein,IGF1-RFP)绵羊中外源基因的拷贝数.[方法]以甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)作为绵羊的内源参照基因,梯度稀释法.[结果]分别获得RFP和GAPDH基因的Q值与起始模板数的相关性标准曲线,R2分别为0.999和0.999,相关性高.通过比较目的基因RFP和GAPDH起始模板数,得到外源基因在转基因绵羊中的拷贝数.编号0152、0216、0217、0218的转基因绵羊拷贝数分别为3、1、1、1.[结论]以IGF-Ⅰ转基因细毛羊为研究对象,针对外源基因序列和内源参照基因序列设计特异性引物,利用实时荧光定量PCR法对IGF-Ⅰ转基因细毛羊外源基因的拷贝数进行检测,并且准确检测外源基因的拷贝数.