多重实时荧光定量PCR分析转基因烟草外源基因拷贝数

• 作者: 付强 余婧 林世锋 赵杰宏 邹颉 郭玉双
• 来源期刊: 中国烟草学报
• 关键词: 转基因烟草 多重实时荧光定量PCR 外源基因 拷贝数
• 年，卷（期）: 2017,（4）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 92-97
• 页数: 6页
• 字数: 4006字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16472/j.chinatobacco.2017.049

摘要

[目的]采用多重实时荧光定量PCR方法在一个反应内同时检测转基因烟草中插入外源基因35S、NOS、NPT Ⅱ的拷贝数.[方法]将转基因阳性参照烟草基因组DNA经梯度稀释,通过多重荧光定量PCR反应同时获得烟草内源参照基因NR、外源基因35S、NOS、NPT Ⅱ的相关性标准曲线方程,将待测株系外源基因的Ct值代入标准曲线方程后估算其拷贝数.[结果]获得了上述4个基因的标准曲线,其R2均接近于1,相关性较高.在检测的六个转基因株系中初筛到3株3个外源基因均为单拷贝的株系.[结论]可使用该方法对转基因烟草外源基因插入拷贝数进行估算,为获得稳定遗传材料提供初筛依据.