慢病毒介导稳定表达MCM7、CDC6细胞株的建立

• 作者: 张永军 李金龙 李静静 郑典鹏
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 医学
• 关键词: 细胞分裂周期蛋白6 微小染色体维持蛋白7 慢病毒 稳定细胞株 细胞周期
• 年，卷（期）: 2018,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 411-416,424
• 页数: 7页
• 分类号: R735.7
• 语种: 中文
• DOI: 10.16519/j.cnki.1004-311x.2018.05.0072

摘要

[目的]构建包装微小染色体维持蛋白7(Mcm7)、细胞分裂周期蛋白6(Cdc6)过表达慢病毒,并筛选HepG2和LO2稳定过表达细胞株.[方法]通过PCR获得人的mcm7、cdc6基因,采用双酶切法构建重组慢病毒过表达载体.慢病毒过表达载体与psPAX2、pMD2.G包装质粒共转染293T细胞后包装出慢病毒.慢病毒感染HepG2和LO2后,通过有限稀释法筛选获得稳转细胞株,再经qPCR以及Western Blot鉴定过表达效果,FACS检测周期分布.[结果]成功构建并包装出了慢病毒,慢病毒滴度为1.3×106TU/mL,感染HepG2和LO2细胞后筛选获得稳转细胞株,并从mRNA和蛋白水平验证,Mcm7稳转株过表达效率超过0.4倍,Cdc6稳转株过表达效率超12倍,稳转株周期分布与母代细胞没有显著差异(P＞0.05).[结论] Mcm7、Cdc6稳转株构建成功,稳转株过表达效果明显,Mcm7、Cdc6的稳定过表达没有扰乱细胞周期进程.