双峰驼血清IgG亚型的分离纯化及多克隆抗体的制备

• 作者: 令小东 何晚红 刘磊 张旺东 李东海 李建飞 王雯慧 程翠翠 贾帅 高欣
• 来源期刊: 兽类学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 双峰驼 IgG亚型 分离纯化 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2018,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 486-490
• 页数: 5页
• 分类号: Q461
• 语种: 中文
• DOI: 10.16829/j.slxb.150139

摘要

双峰驼IgG亚型包含IgG1、IgG2和IgG3,其中IgG2和IgG3为重链抗体,在结构上与IgG1存在显著差异.为获取双峰驼血清中的IgG1、IgG2和IgG3,并分析其抗原特异性和抗体特异性,本文交替使用Protein A和Protein G亲和层析柱,对其分离纯化,并通过聚丙烯酰胺凝胶电泳进行鉴定;之后分别制备兔抗双峰驼IgG1、IgG2和IgG3的多克隆抗体,通过ELISA对制备的多克隆抗体的效价进行测定;最后应用Western blot评估这3个亚型多克隆抗体的特异性,进而对双峰驼血清中IgG1、IgG2和IgG3的抗原特异性进行分析.结果表明,应用Protein A和Protein G亲和层析柱成功分离纯化出双峰驼血清中的IgG1、IgG2和IgG3;并制备兔抗双峰驼IgG1、IgG2和IgG3的多克隆抗体效价均在1:10000以上,且所获得的多克隆抗体分别与IgG1、IgG2和IgG3之间均存在交叉反应,但兔抗双峰驼IgG1多克隆抗体较其它两个亚型多克隆抗体特异性低.结果证明,双峰驼IgG1、IgG2和IgG3均具有良好的免疫原性,三者结构虽存在显著差异,但其抗原特性类似.