伪狂犬病毒被膜蛋白VP22单克隆抗体的制备及免疫电镜方法的建立

• 作者: 仇铮 刘慧敏 刘春国 史智宾 王靖飞 陈利红
• 来源期刊: 黑龙江畜牧兽医（上半月）
• 学科: 农学
• 关键词: 伪狂犬病毒 被膜蛋白 单克隆抗体 细胞融合 杂交瘤细胞 免疫电镜
• 年，卷（期）: 2018,（6）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 37-40,252
• 页数: 5页
• 分类号: S852.65+9.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.13881/j.cnki.hljxmsy.2017.12.0414

摘要

为了制备伪狂犬病毒(PRV)被膜蛋白VP22的单克隆抗体并建立免疫电镜方法,试验首先构建真核重组质粒pCAGGS-UL49,酶切及间接免疫荧光验证该质粒是否构建成功,然后用真核重组质粒以100μg/只的剂量免疫6周龄Balb/c雌性小鼠,经过4次免疫后进行细胞融合,采用间接ELISA法筛选阳性克隆,抗体亚类试剂盒鉴别抗体亚类,收集第5,10,20代次的杂交瘤细胞上清液用ELISA法检测其效价,Western-blot法鉴定其特异性,将该抗体分别稀释50,100,200倍并作为一抗,免疫电镜检测VP22蛋白的表达效果.结果表明:获得1株稳定分泌VP22蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞(3D6),该单克隆抗体的亚类为IgM,能与VP22蛋白发生特异性反应,100倍稀释的单克隆抗体可达到利用免疫电镜技术检测细胞内该蛋白表达的最佳效果.说明筛选得到的PRV被膜蛋白VP22单克隆抗体和建立的免疫电镜方法可用于该病毒的致病性及装配机制研究.