家蝇u93基因的原核表达与体外抗菌活性检测

• 作者: 吴建伟 国果 常振策 杨阳 王兵 王涛 马素贞 龙慧玲
• 来源期刊: 贵州医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 家蝇 u93基因 原核表达 抗菌活性
• 年，卷（期）: 2018,（9）
• 所属期刊栏目: 专题研究
• 页码范围: 997-1002
• 页数: 6页
• 分类号: R384.2
• 字数: 3879字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19367/j.cnki.1000-2707.2018.09.002

摘要

目的:构建家蝇u93基因原核表达体系,检测重组表达产物的体外抗菌活性.方法:采用生物信息学方法,分析u93基因编码蛋白的理化特性;将前期构建的pET29a-u93重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21/DE3中,以异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组蛋白并通过SDS-PAGE对表达产物进行分析;纯化重组蛋白,采用微量稀释法检测u93重组蛋白的体外抗菌活性.结果:生物信息学分析显示,u93编码基因开放阅读框全长363 bp,共编码120个氨基酸,理论分子量为13.35 kD,等电点为7.52,信号肽位于1～20位氨基酸之间;u93重组蛋白在大肠杆菌BL21/DE3中主要以包涵体形式表达,重组蛋白的相对分子质量与理论值相一致;u93重组蛋白对白色念珠菌的最小抑菌浓度(MIC)为21 mg/L、对近平滑念珠菌MIC为12.5 mg/L、对克柔念珠菌MIC为12.5 mg/L、对热带念珠菌MIC为12.5 mg/L,但不能抑制金黄色葡萄球菌及大肠埃希菌的生长繁殖.结论:成功构建u93原核表达系统,重组表达的u93蛋白对念珠菌具有较强的抑杀活性.