慢病毒介导CDCA5敲低的三阴乳腺癌细胞的构建及鉴定

• 作者: 吕璐冶 周涛 宋楠 张学敏 李万金 韩秋影 黄燕
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 细胞分裂周期相关蛋白5(CDCA5) 三阴乳腺癌 稳定干涉 慢病毒shRNA质粒
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 329-334
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 字数: 3749字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2018.03.004

摘要

目的:利用RNA干扰技术与慢病毒感染体系构建稳定干涉细胞分裂周期相关蛋白5(CDCA5)基因的三阴乳腺癌细胞系,研究CDCA5在三阴乳腺癌细胞增殖过程中发挥的功能.方法:首先通过分子克隆技术构建稳定干涉CDCA5基因的慢病毒短发夹RNA(shRNA)质粒,并用PCR、琼脂糖凝胶电泳和深度测序技术进行验证;在此基础上,利用慢病毒感染体系将干涉质粒进行病毒包装、感染三阴乳腺癌细胞系MDA-MB-231,通过SDS-PAGE、Western印迹检测MDA-MB-231细胞中CDCA5蛋白质的表达水平;通过细胞活力检测实验研究干涉CDCA5对三阴乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞增殖能力的影响.结果:琼脂糖凝胶电泳与DNA测序结果显示稳定干涉CDCA5载体构建成功;SDS-PAGE及Western印迹结果显示稳定干涉CDCA5质粒在MDA-MB-231中获得表达,并能够敲低CDCA5蛋白表达水平,稳定干涉CDCA5的三阴乳腺癌细胞系构建成功;细胞活力检测实验结果表明,与对照组相比,干涉CDCA5蛋白表达水平能有效抑制MDA-MB-231细胞的增殖能力.结论:运用RNA干扰技术与慢病毒感染体系能够构建稳定干涉CDCA5的三阴乳腺癌细胞系,该细胞系的建立为进一步研究CDCA5在三阴乳腺癌发生、发展及转移过程中的作用及分子机制提供了重要的实验材料.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张学敏		40	128	6.0	9.0
2	周涛		23	177	6.0	13.0
3	韩秋影		8	11	2.0	3.0
4	李万金		2	0	0.0	0.0
5	黄燕		2	0	0.0	0.0
6	吕璐冶		2	0	0.0	0.0
7	宋楠		2	0	0.0	0.0