B型肉毒毒素轻链的高效制备及活性鉴定

• 作者: 李涛 王慧 罗森 陈芳红
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 内毒毒素 金属内肽酶 原核表达
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 59-63
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 字数: 3143字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2018.01.012

摘要

目的:在大肠杆菌中高效表达B型肉毒毒素轻链(BoNT/B LC)并纯化,研究其生物学活性.方法:根据报道的BoNT/B LC基因序列设计引物,从肉毒梭菌中扩增BoNT/B LC基因片段,将其克隆至原核表达载体pET-22b中,重组质粒转化大肠杆菌BL21 (DE3)Rosetta感受态细胞,构建重组大肠杆菌pET-22bBoNT/B LC/BL21 (DE3)Rosetta,在20℃条件下用IPTG诱导目的蛋白表达,表达产物经HisTrap FF柱纯化,用SDS-PAGE对目的蛋白进行鉴定,并利用相应底物对纯化产物进行生物活性分析.结果与结论:构建了重组大肠杆菌pET-22bBoNT/B LC/BL21 (DE3)Ro-setta,BoNT/B LC表达量达到了细菌总蛋白的30％左右,通过一步亲和纯化目的蛋白后经SDS-PAGE检测其纯度在95％以上,制备的重组LC的酶活略高于B型肉毒毒素全毒素,可作为试剂用于BoNT/B LC抑制剂高通量体外检测方法的研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王慧	军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室	48	107	5.0	8.0
2	李涛	军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室	16	28	4.0	5.0
3	陈芳红	军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室	3	0	0.0	0.0
4	罗森		6	4	1.0	2.0