大豆胞囊线虫侵染下野生大豆根组织实时定量PCR分析中内参基因的筛选

• 作者: 刘晓冬 李玉秋 王玉民 王英男 董英山 袁翠平 赵洪锟 齐广勋
• 来源期刊: 大豆科学
• 学科: 农学
• 关键词: 野生大豆 内参基因 实时定量PCR 大豆胞囊线虫
• 年，卷（期）: 2018,（1）
• 所属期刊栏目: 遗传育种·分子生物学
• 页码范围: 22-31
• 页数: 10页
• 分类号: S565.1|S432.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.11861/j.issn.1000-9841.2018.01.0022

摘要

以高抗和高感HG 0大豆胞囊线虫的野生大豆种质为试验材料,采用qRT-PCR技术检测了ACT11(Glyma.18G290800)、Tubulin_motif(Glyma.19G194800)等24个候选持家基因在不同大豆胞囊线虫侵染时期(接种后9,15和20 d)野生大豆根系中的基因表达情况,除Actin(Glyma.08G182200)出现了非特异扩增外,其它23个持家基因的qRT-PCR扩增效果均理想,扩增特异性高.分析上述23个持家基因的表达丰度,并利用BestKeeper、geNorm和Normfinder对其表达稳定性进行评价.结果表明:持家基因间的表达丰度不尽相同,而且有些持家基因在不同品种间或不同处理间(接种虫卵和接种水)也存在表达丰度的差异.23个持家基因的表达稳定性也不相同,综合来看,表达最不稳定的基因为Cons9(Glyma.10G152200)、Cons2(Glyma.17G138500)、Cons1(Glyma.15G270900)和Tubulin_motif (Glyma.20G136000),本试验条件下它们不适宜作内参基因;其余持家基因相对稳定,本试验条件下可选择Tubulin_motif(Glyma.15G132200),Cons6/SKIP16(Glyma.12G051100)或Tubulin_motif(Glyma.05G 110200)作为内参基因,它们表达量较高,表达最为稳定,其Ct平均值分别为25.7、26.5和25.0,标准偏差分别为0.540、0.575和0.490,geNorm软件评价其稳定性的M值分别为0.698、0.715和0.727.该研究为野生大豆抗胞囊线虫相关基因的表达分析提供了参考.