斜纹夜蛾保幼激素环氧水解酶基因的克隆和原核表达

• 作者: 张丽丽 杨正飞 武怡琼 郭丽 阚云超 魏佳平
• 来源期刊: 河南农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 斜纹夜蛾 保幼激素环氧水解酶 克隆 序列分析 原核表达 重组蛋白
• 年，卷（期）: 2018,（12）
• 所属期刊栏目: 植物保护
• 页码范围: 84-89
• 页数: 6页
• 分类号: S433.4
• 字数: 4673字
• 语种: 中文
• DOI: 10.15933/j.cnki.1004-3268.2018.12.013

摘要

为分析斜纹夜蛾(Spodoptera litura)保幼激素环氧水解酶(Juvenile hormone epoxide hydrolase,JHEH)基因在其生长发育过程中的功能,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增SlJHEH基因的开放阅读框,并进行原核表达.SlJHEH基因开放阅读框为1 389 bp,编码462个氨基酸,预测蛋白质分子质量为52 ku,等电点为8.68.氨基酸序列存在催化三联体Asp226、Glu402和His429氨基酸残基及阴氧离子洞Tyr297、Tyr372和HGWP花样结构氨基酸残基.系统发育树分析结果表明,Sl JHEH与棉铃虫(Helicoverpa armigera)JHEH亲缘关系最近,氨基酸序列同源性高达78％.将SlJHEH的编码区连接到原核表达载体p ET32a上,成功构建了重组载体pET32aSlJHEH,转入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达.对表达产物进行SDS-PAGE和Western blotting检测,结果显示,斜纹夜蛾JHEH基因在大肠杆菌中得到高效且准确的表达.