稳定敲低NLRP3基因的小鼠巨噬细胞系的建立与鉴定

• 作者: 任睿芳 吴珺 安辰 张海丽 李晓瑞 游雷鸣 郝钰 陈丹军
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: NLRP3炎性体 巨噬细胞 基因敲低 shRNA
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 398-402
• 页数: 5页
• 分类号: Q291
• 字数: 4122字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2018.03.016

摘要

目的:建立NLRP3炎性体缺损的小鼠巨噬细胞模型.方法:构建靶向NLRP3基因的带GFP和Neo标记的shRNA表达载体,转染小鼠巨噬细胞RAW264.7后用G418抗性标记筛选稳定转染的细胞克隆,并利用GFP标记通过流式细胞仪进一步纯化,得到的细胞命名为RAWNKD.利用定量PCR检测RAWNKD细胞及其在LPS和ATP联合刺激下NLRP3基因的稳定抑制效果.结果:RAWNKD细胞GFP标记的阳性率在80%以上,NLRP3基因的抑制率超过90%,即使用LPS和ATP联合刺激NLRP3基因mRNA增加也不明显.结论:成功建立了NLRP3基因稳定敲低的小鼠巨噬细胞系,这种NLRP3炎性体缺损的巨噬细胞是探究NLRP3炎性体活化途径及其介导的炎症信号转导的有力工具.