水牛MYF5基因克隆分析及真核表达载体构建

• 作者: 奉玲丽 崔佳瑜 张瑞门 杨素芳 潘雨 石德顺 邓彦飞 韦英明
• 来源期刊: 中国畜牧杂志
• 学科: 农学
• 关键词: 水牛 MYF5基因 克隆 载体构建 骨骼肌发育
• 年，卷（期）: 2018,（10）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 100-105
• 页数: 6页
• 分类号: S823.2
• 字数: 4253字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19556/j.0258-7033.2018-10-100

摘要

本研究旨在对广西沼泽型水牛MYF5基因进行克隆和分析,并构建其真核表达载体.应用RT-PCR方法从水牛肌肉组织中扩增MYF5基因,测序鉴定后对其核苷酸序列和蛋白质序列进行生物信息学分析,同时构建该基因真核表达载体,并在细胞水平验证所构建载体的正确性.结果表明:水牛MYF5基因编码区序列长度为768 bp,编码255个氨基酸,其核苷酸序列与牛、山羊、猪、人、猩猩和狼相应序列的相似性分别为99％、98％、94％、91％、90％和89％;水牛MYF5基因在不同物种及进化过程中具有高度保守性;MYF5蛋白为膜外蛋白,具有MYOD家族标志性MYOD结构域;构建水牛MYF5基因真核表达栽体pMXs-MYF5,转染HEK293T、水牛颗粒细胞后产生绿色荧光信号,表明细胞表达MYF5基因.