甲基化特异性PCR技术优化试验

• 作者: 何玉霞 张兵 邓丽
• 来源期刊: 中国职业医学
• 学科: 医学
• 关键词: 甲基化特异性PCR PCR p15 甲基化检测 特异性
• 年，卷（期）: 2018,（4）
• 所属期刊栏目: 研究与实践
• 页码范围: 476-479
• 页数: 4页
• 分类号: R13
• 语种: 中文
• DOI: 10.11763/j.issn.2095-2619.2018.04.011

摘要

目的 建立一种高特异性的甲基化特异性聚合酶链式反应(MSP)法.方法 以P15基因为目的基因,以经亚硫酸氢盐转化的全甲基化人类基因组DNA及亚硫酸氢盐转化的全非甲基化人类基因组DNA为模版,采用Methprimer软件预测p15启动子甲基化岛并设计甲基化及非甲基化引物,对甲基化及非甲基化DNA模板进行聚合酶链式反应(PCR).根据MSP的PCR阶段的退火温度分为普通温度组(甲基化引物及非甲基化引物退火温度分别为58、55℃)及提高温度组(甲基化引物及非甲基化引物退火温度分别为60、57 ℃).在普通温度组的基础上,通过增加镁离子(Mg2+)浓度、添加PCR反应体系中二甲基亚砜(DMSO)以优化PCR反应体系.结果 MSP的PCR反应阶段,普通温度组出现了非特异性扩增产物,即假阳性及假阴性;提高温度组非特异性扩增减弱,特异性扩增同等降低.普通温度的优化PCR体系组非特异性扩增消失,可以完全消除假阴性及假阳性.结论 设置普通退火温度同时适当地增加Mg2+浓度及DMSO有利于保证MSP结果的特异性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张兵	南充市中心医院检验科	12	24	2.0	4.0
2	邓丽	南充市中心医院检验科	10	5	1.0	2.0
3	何玉霞	南充市中心医院检验科	6	22	2.0	4.0