双孢蘑菇酪氨酸酶基因在酿酒酵母中的异源表达及其酶学特性

• 作者: 乔明强 刘全力 吴玉珍 张秀明 徐海津 洪亚天 白艳玲
• 来源期刊: 微生物学报
• 关键词: 酪氨酸酶 异源表达 双孢蘑菇 酿酒酵母 酶学特性
• 年，卷（期）: 2018,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 423-431
• 页数: 9页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.20170201

摘要

[目的]在酿酒酵母中异源表达双孢蘑菇来源的酪氨酸酶基因PPO2,并研究酪氨酸酶在酿酒酵母胞内及胞外的酶学特性.[方法]提取双孢蘑菇总RNA,通过RT-PCR克隆酪氨酸酶基因PPO2,构建表达载体pSP-G1-PPO2,并转化至酿酒酵母进行表达,采用镍亲和层析纯化蛋白并研究其酶学性质.[结果]在酿酒酵母中正确表达了大小为65 kDa的酪氨酸酶蛋白.重组酶能催化底物酪氨酸产生黑色素.体外活性测定表明,酪氨酸酶催化最适温度为45C,以酪氨酸和多巴为底物时最适pH分别为7.0和8.0.在酿酒酵母中测得底物酪氨酸浓度低于2.5 mg/mL时,黑色素的产量与底物浓度呈现正相关性.[结论]来源于双孢蘑菇的酪氨酸酶基因PPO2在酿酒酵母中成功表达,重组酶具有良好的酶学特性.利用酪氨酸酶产物黑色素的产量与底物浓度呈现正相关性这一特性,可将其作为细胞酪氨酸产量的传感器,为高通量筛选酪氨酸高产菌株提供了思路.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	白艳玲	南开大学生命科学学院	60	310	10.0	15.0
2	张秀明	南开大学生命科学学院	29	109	6.0	9.0
3	乔明强	南开大学生命科学学院	33	162	7.0	12.0
7	徐海津	南开大学生命科学学院	25	79	5.0	8.0
8	吴玉珍	南开大学生命科学学院	2	2	1.0	1.0
9	洪亚天	南开大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0
13	刘全力	南开大学生命科学学院	1	0	0.0	0.0