表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白基因的新城疫病毒感染性克隆的构建及病毒拯救

• 作者: 南福龙 庄忻雨 张萍 张赫 张金勇 步志高 田明尧 解长占 金宁一 鲁会军
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 新城疫病毒 LaSota GP5蛋白 病毒拯救
• 年，卷（期）: 2018,（5）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 841-845
• 页数: 5页
• 分类号: S852.65
• 语种: 中文
• DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2018.05.01

摘要

应用反向遗传技术对新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV) LaSota株感染性克隆PBRN-FL质粒进行操作,构建插入欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV) ORF5基因的重组质粒LaSota-ORF5并进行病毒拯救及鉴定.依据GenBank所发表的欧洲型PRRSV LV株ORF5序列,设计引物扩增ORF5片段,通过PBRN-FL质粒上P和M基因间的Pme Ⅰ酶切位点插入目的片段,构建重组质粒LaSota-ORF5.采用磷酸钙转染法将重组质粒和PCI-NP、PCI-P、PCI-L等3种辅助质粒共转染BSR-T7/5/细胞拯救病毒并对其分别进行RT-PCR、间接免疫荧光(IFA)和Western blot(WB)试验鉴定.结果显示:拯救病毒的RT-PCR产物测序结果正确,IFA出现绿色荧光,WB试验条带大小符合预期,证明GP5蛋白有效表达.结果表明:成功构建并拯救得到重组病毒rLaSota-GP5,为制备表达PRRSV GP5蛋白的重组NDV疫苗奠定基础.