利用同源重组构建BMP6基因真核表达载体及在成纤维细胞中表达量的研究

• 作者: 刘开东 刘积凤 张梦瑶 杨峰 柳楠 贺建宁
• 来源期刊: 中国畜牧杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 同源重组 成纤维细胞 BMP6基因转染 RT-PCR Western Blot
• 年，卷（期）: 2018,（8）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 101-106
• 页数: 6页
• 分类号: Q786
• 字数: 4962字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19556/j.0258-7033.2018-08-101

摘要

本研究旨在利用同源重组技术构建敖汉细毛羊BMP6基因表达载体及转染成纤维细胞后基因的表达量变化.实验以敖汉细毛羊为研究对象,采集40日龄的胎羊.首先,提取RNA并反转录成cDNA,参照GenBank中BMP6基因序列信息及pcDNA3.1载体序列设计1对含有同源臂的引物,通过PCR扩增获得BMP6基因片段、利用SoSo试剂盒将目的片段连接到pcDNA3.1真核表达载体上.鉴定pcDNA3.1-BMP6表达载体构建成功后,转化大肠杆菌(E.coli) DH5α感受态细胞;其次对敖汉细毛羊的成纤维细胞进行分离培养,并将构建的pcDNA3.1-BMP6表达载体转染成纤维细胞,利用实时荧光定量PCR技术和Western Blot技术检测BMP6基因在成纤维细胞中表达量的变化.结果表明:经酶切、测序鉴定pcDNA3.1-BMP6表达载体构建成功,并且转染成纤维细胞后BMP6基因的mRNA、蛋白表达量均明显升高,且转染组的表达量极显著高于对照组(P＜0.01).在本实验条件下,利用同源重组技术成功构建了敖汉细毛羊BMP6基因表达载体,并且成功转染成纤维细胞,基因在细胞中过表达,为进一步研究其功能奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	柳楠	青岛农业大学动物科技学院	58	219	8.0	10.0
2	刘积凤	青岛农业大学动物科技学院	25	109	7.0	9.0
3	刘开东		16	47	5.0	6.0
4	贺建宁	青岛农业大学动物科技学院	32	104	6.0	8.0
5	张梦瑶	青岛农业大学动物科技学院	13	10	2.0	3.0
6	杨峰	内蒙古农业大学动物科技学院	8	18	2.0	4.0