敖汉细毛羊Notch1基因真核表达载体的构建及在成纤维细胞中表达量的研究

• 作者: 刘开东 刘积凤 张梦瑶 柳楠 王国义 贺建宁 赵然然
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 农学
• 关键词: 成纤维细胞 表达载体构建 Notch1转染 RT-PCR 基因表达
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 遗传育种
• 页码范围: 1-6
• 页数: 6页
• 分类号: S826
• 字数: 3693字
• 语种: 中文

摘要

本研究旨在构建敖汉细毛羊Notch1基因表达载体及转染成纤维细胞后基因表达量变化.试验以敖汉细毛羊40日龄胎儿为研究对象,提取RNA反转录并参照GenBank中Notch1基因序列信息设计1对引物,通过PCR反应扩增获得Notch1基因片段,将得到的Notch1基因片段连接至pGM-T载体,构建pGM-T-Notch1克隆载体并转化大肠杆菌(E.coli) DH5α感受态细胞,提取质粒进行酶切鉴定后构建pcDNA3.1-Notch1重组表达载体,转化大肠杆菌(E.coli) DH5α感受态细胞.将敖汉细毛羊的成纤维细胞进行分离培养,并将构建的pcDNA3.1-Notch1瞬时转染成纤维细胞,利用荧光定量PCR技术检测Notch1基因在成纤维细胞中表达量的变化.结果 显示:经酶切、测序鉴定质粒pcDNA3.1-Notch1构建成功,并且转染成纤维细胞后Notch1基因的表达量升高,且转染组的表达量极显著地高于对照组(P＜0.01).结论:成功构建了敖汉细毛羊Notch1基因的表达载体,并且成功转染成纤维细胞,基因表达量明显升高,结果可为进一步研究其功能奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	柳楠	青岛农业大学动物科技学院	58	219	8.0	10.0
2	刘积凤	青岛农业大学动物科技学院	25	109	7.0	9.0
3	刘开东		16	47	5.0	6.0
4	贺建宁	青岛农业大学动物科技学院	32	104	6.0	8.0
5	张梦瑶	青岛农业大学动物科技学院	13	10	2.0	3.0
6	赵然然	青岛农业大学动物科技学院	1	0	0.0	0.0