基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取       
摘要:
[目的]从番茄中克隆高效转录的S1U6启动子,构建CRISPR/Cas9基因编辑载体,并在番茄中建立CRISPR/Cas9系统,为番茄功能基因组学和分子育种研究提供技术基础.[方法]采用PCR方法从‘中蔬四号’番茄品种中克隆4种S1U6启动子,利用Transfer PCR方法分别对4个启动子进行两种不同长度的截短,分别构建8个截短的S1U6启动子驱动GUS的植物融合表达载体.利用农杆菌瞬时转化法分别转染番茄叶片,通过GUS染色筛选出在番茄叶片中转录活性较高的S1U6-2启动子.采用DNA重组技术构建以S1U6-2为启动子驱动sgRNA,以番茄白粉病相关基因ML01和EDR1为靶序列的CRISPR/Cas9基因组编辑载体.载体构建成功后,采用PEG法转化番茄原生质体,提取基因组DNA,采用酶切/PCR法分析内源基因突变情况;采用测序法分析内源基因突变的类型.利用突变位点频率分布图来验证番茄内源启动子在番茄CRISPR/Cas9系统中的有效性.[结果]经过两轮PCR,共获得4种8个不同长度的番茄U6启动子,其长度分别是452、202、448、206、433、190、448和218 bp,启动子序列比对分析发现番茄U6启动子与拟南芥U6启动子一样,也含有比较保守的两个元件,USE和TATA框.成功构建了8个S1U6启动子分别驱动GUS的植物融合表达载体.番茄叶片染色结果显示转化后的番茄叶片均被染成蓝色,表明克隆的番茄8个S1U6启动子均具有转录活性.选择S1U6-2P4为启动子驱动sgRNA,成功构建番茄白粉病相关基因ML01和EDR1为靶序列的CRISPR/Cas9基因组编辑载体,验证结果表明番茄内源启动子S1U6-2P4能有效地驱动sgRNA的转录,并成功实现对番茄内源基因的编辑.内源基因突变的类型都为碱基替换,突变热点仅存在于内源基因靶序列区.[结论]成功克隆了4种在番茄叶片中高效转录的S1U6启动子;基于S1U6-2启动子的CRISPR/Cas9基因组编辑载体,在番茄中成功实现对内源基因的编辑.
推荐文章
棉花U3和U6启动子在CRISPR/Cas9基因组编辑体系中的功能鉴定
棉花
CRISPR/Cas9
基因组编辑
U3/U6启动子
原生质体
棉花不同GbU6启动子截短克隆及功能鉴定
棉花
GbU6启动子
截短克隆
真空渗透
棉花花粉
毛竹不同截短U3启动子的克隆及表达分析
基因组编辑
LUC活性
PeU3启动子
毛竹
内容分析
关键词云
关键词热度
相关文献总数  
(/次)
(/年)
文献信息
篇名 番茄U6启动子的克隆及CRISPR/Cas9基因编辑体系的建立
来源期刊 中国农业科学 学科
关键词 CRISPR/Cas9 S1U6启动子 克隆 番茄 基因编辑
年,卷(期) 2018,(2) 所属期刊栏目 园艺
研究方向 页码范围 315-326
页数 12页 分类号
字数 语种 中文
DOI 10.3864/j.issn.0578-1752.2018.02.011
五维指标
传播情况
(/次)
(/年)
引文网络
引文网络
二级参考文献  (80)
共引文献  (102)
参考文献  (30)
节点文献
引证文献  (8)
同被引文献  (35)
二级引证文献  (6)
1990(2)
  • 参考文献(1)
  • 二级参考文献(1)
2002(5)
  • 参考文献(0)
  • 二级参考文献(5)
2003(5)
  • 参考文献(1)
  • 二级参考文献(4)
2004(2)
  • 参考文献(0)
  • 二级参考文献(2)
2005(1)
  • 参考文献(0)
  • 二级参考文献(1)
2007(5)
  • 参考文献(1)
  • 二级参考文献(4)
2008(3)
  • 参考文献(0)
  • 二级参考文献(3)
2009(3)
  • 参考文献(0)
  • 二级参考文献(3)
2010(1)
  • 参考文献(0)
  • 二级参考文献(1)
2011(3)
  • 参考文献(0)
  • 二级参考文献(3)
2012(5)
  • 参考文献(2)
  • 二级参考文献(3)
2013(37)
  • 参考文献(8)
  • 二级参考文献(29)
2014(24)
  • 参考文献(8)
  • 二级参考文献(16)
2015(10)
  • 参考文献(5)
  • 二级参考文献(5)
2016(2)
  • 参考文献(2)
  • 二级参考文献(0)
2017(2)
  • 参考文献(2)
  • 二级参考文献(0)
2018(3)
  • 参考文献(0)
  • 二级参考文献(0)
  • 引证文献(3)
  • 二级引证文献(0)
2018(3)
  • 引证文献(3)
  • 二级引证文献(0)
2019(9)
  • 引证文献(5)
  • 二级引证文献(4)
2020(2)
  • 引证文献(0)
  • 二级引证文献(2)
研究主题发展历程
节点文献
CRISPR/Cas9
S1U6启动子
克隆
番茄
基因编辑
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
中国农业科学
半月刊
0578-1752
11-1328/S
大16开
北京中关村南大街12号
2-138
1960
chi
出版文献量(篇)
9193
总下载数(次)
12
相关基金
国家自然科学基金
英文译名:the National Natural Science Foundation of China
官方网址:http://www.nsfc.gov.cn/
项目类型:青年科学基金项目(面上项目)
学科类型:数理科学
  • 期刊分类
  • 期刊(年)
  • 期刊(期)
  • 期刊推荐
论文1v1指导