t-PA基因慢病毒表达载体的构建及其在内皮祖细胞中的表达研究

• 作者: 方立 李迎 祁珩 黄芳 黄钦
• 来源期刊: 按摩与康复医学
• 学科: 生物学
• 关键词: 基因克隆 组织纤溶酶原激活物 慢病毒表达载体 内皮祖细胞
• 年，卷（期）: 2018,（8）
• 所属期刊栏目: 临床研究
• 页码范围: 62-65
• 页数: 4页
• 分类号: Q78
• 字数: 2902字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-1879.2018.08.029

摘要

目的:构建t-PA基因慢病毒表达载体并转染脐血来源的内皮祖细胞,评估其转染后功能变化情况.方法:RT-PCR获得t-PA cDNA,将真核表达质粒pcDNA3.1(+)和t-PA基因片段分别双酶切,构建pcDNA3.1(+)/t-PA质粒.对其进行酶切鉴定和测序,使目的基因连接入载体质粒中,构建成重组慢病毒载体质粒,制备包装病毒质粒转染内皮祖细胞.倒置荧光显微镜下观察转染24h后内皮祖细胞中绿色荧光蛋白的表达情况,RT-qPCR和Western blot检测转染后t-PA基因的表达水平.采用Brdu标记细胞DNA、BCA蛋白定量、MTT分析法检测内皮祖细胞DNA合成能力、总蛋白含量和细胞存活率.结果:成功构建了含有t-PA基因cDNA序列的慢病毒表达载体pLenti6.3-t-PA,DNA测序结果完全正确,倒置荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白表达,内皮祖细胞转染重组慢病毒后t-PA表达水平比未转染组显著增高(P＜0.01).t-PA慢病毒表达载体转染内皮祖细胞后,内皮祖细胞DNA合成能力、细胞总蛋白含量、细胞存活率均较对照组无明显变化.结论:成功构建t-PA基因慢病毒表达系统,转染内皮祖细胞后对其DNA合成、总蛋白合成、细胞存活率无明显影响.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	方立		8	22	2.0	4.0
2	黄钦		3	3	1.0	1.0
3	李迎		13	50	4.0	6.0
4	祁珩		10	25	2.0	4.0
5	黄芳		18	43	3.0	6.0