葱属蔬菜作物叶绿体DNA提取及其质量评价体系的建立

• 作者: 于占东 吴雄 孙雨晴 杨亚会 杨妍妍 陈立 霍雨猛
• 来源期刊: 分子植物育种
• 关键词: 葱属蔬菜作物 叶绿体DNA 高盐低pH值法 蔗糖DNase法
• 年，卷（期）: 2018,（20）
• 所属期刊栏目: 现代遗传育种技术
• 页码范围: 6802-6807
• 页数: 6页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13271/j.mpb.016.006802

摘要

为了探究不同提取方法对葱属蔬菜作物叶绿体DNA提取效果的影响,首先以大葱叶片为实验材料,采用高盐低pH值法和蔗糖DNase法,对其进行叶绿体DNA提取测试.结果表明,高盐低pH法优于蔗糖DNase法,其DNA纯度相似,A260/A280值分别1.984和1.977;产率差异大,分别为0.482μg/g FW (freshweight,FW)和0.059 μg/g FW,高盐低pH值法是蔗糖DNase法产率的8.17倍.随后,利用叶绿体MarK、线粒体Atp6和核LFY基因设计引物,根据各组引物自身的扩增效率,以试剂盒提取的总DNA为对照,分别对三种细胞器DNA拷贝数的比值进行评估研究,高盐低pH法提取叶绿体DNA含量是试剂盒法的78.38倍,而蔗糖DNase法为15.51倍,高盐低pH法是蔗糖DNase法的5.05倍.高盐低pH法提取的叶绿体DNA产率和含量均优于蔗糖DNase法,同时在此基础建立了细胞器DNA含量定量分析方法.随后我们用高盐低pH法对葱属蔬菜作物的洋葱、大蒜和韭菜进行了测试,获得了预期的效果.该研究为今后葱属作物高效、高纯度、无污染的叶绿体DNA提取和葱属蔬菜作物细胞器全基因组测序提供依据.