人TSPAN12蛋白大胞外片段的可溶表达和纯化

• 作者: 串俊兰 杨正林 王刚刚 谢天
• 来源期刊: 中华眼视光学与视觉科学杂志
• 关键词: 人源四次跨膜超家族蛋白12 麦芽糖结合蛋白 原核表达 可溶蛋白 纯化
• 年，卷（期）: 2019,（12）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 881-887
• 页数: 7页
• 字数: 4118字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1674-845X.2019.12.001

摘要

目的:构建人源四次跨膜超家族蛋白12大胞外片段(TSPAN12-LEL)的原核表达质粒,诱导表达和纯化后获得可溶的重组蛋白.方法:实验研究.首先将目的基因克隆至pMa1-c2x载体上,再经PCR扩增、酶切、连接,将带麦芽糖结合蛋白(MBP)标签的融合蛋白编码序列克隆至pETDuet-1载体的第一个多克隆位点,同时将大肠杆菌的DsbC基因克隆至pETDuet-1载体的第2个多克隆位点,与重组蛋白共表达,促进二硫键的正确形成.将重组质粒转化至OrigamiB (DE3)菌株中,用异丙基-β-D硫代半乳糖苷诱导表达,经交联直链淀粉树脂亲和层析和阴离子交换层析纯化重组蛋白.结果:成功构建重组表达质粒pETDuet-1-MBP-TSPAN12 LEL-DsbC,诱导表达后在蛋白上清中得到大量带MBP标签的融合蛋白(MBP-TSPAN12 LEL),经SDS-PAGE检测该融合蛋白分子量约为60 kD,与理论大小相符,经亲和层析和阴离子交换层析后能获得大量、高纯度可溶的重组蛋白.结论:经过优化,与DsbC蛋白共表达时,带MBP标签的TSPAN12蛋白大胞外片段可以实现在大肠杆菌中可溶表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	谢天	中国科学院成都生物研究所环境微生物四川省重点实验室	13	140	4.0	11.0
5	王刚刚	中国科学院成都生物研究所环境微生物四川省重点实验室	5	0	0.0	0.0
9	串俊兰	电子科技大学医学院人类疾病基因研究四川省重点实验室	1	0	0.0	0.0