重组人TRAIL胞外片段的原核表达系统选择及蛋白复性研究

• 作者: 乔波 刘顺谊 司马健 吴一凡 吴冬梅 殷志敏 邰一琳 金丽娜
• 来源期刊: 南京师大学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: TRAIL 蛋白表达 复性 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2006,（2）
• 所属期刊栏目: 生命科学
• 页码范围: 85-90
• 页数: 6页
• 分类号: Q816
• 字数: 4281字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-4616.2006.02.020

摘要

采用PCR技术从人肝脏cDNA文库扩增出编码114～281位氨基酸的TRAIL基因片段,将之克隆至原核表达载体pET-30a、pQE-30和pJLA503中,上述重组载体经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE鉴定显示pET-30a系统表达效率最高,目的蛋白占菌体总蛋白含量的40%左右;采用透析法或梯度稀释法对TRAIL胞外区片段包涵体进行复性,非还原SDS-PAGE的结果显示梯度稀释法明显好于透析法;纯化后的TRAIL胞外区片段蛋白具有明显的生物学活性,效果与标准品相似;通过添加不同的折叠促进剂对复性效率影响的研究,确立了TRAIL胞外区片段适宜的复性方法,复性效率达75%～80%.