珠子参实时荧光定量PCR体系的建立与优化

• 作者: 左天 张小海 张绍鹏 张莹 王广 罗飞
• 来源期刊: 武汉轻工大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 珠子参 实时荧光定量PCR PCR体系优化
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 科学研究
• 页码范围: 27-32
• 页数: 6页
• 分类号: R282
• 字数: 4192字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-7386.2019.01.005

摘要

实时荧光定量PCR是一种快速用于鉴定基因表达量的方法,广泛用于微生物、植物和动物基因表达分析中.通过选取合适的内参基因β-actin构建珠子参实时荧光定量PCR体系,为珠子参及其近缘种的基因表达分析奠定基础.主要从两个最基本的要素进行体系优化,即引物浓度和模板浓度.优化先从模板浓度开始,设置模板浓度梯度分别为120 ng/μL、24 ng/μL、4.8 ng/μL、0.96 ng/μL、0.192 ng/μL,基于扩增曲线和扩增效率的计算,得出扩增效率最高的一组,即为最优模板浓度.然后进行引物浓度优化,在最优模板浓度基础上设计一系列的引物浓度分别为10μmol/L、5μmol/L、2.5μmol/L、1.25μmol/L、0.625μmol/L,基于扩增曲线和扩增效率,确定最佳的引物浓度.实验结果表明,当模板浓度为120 ng/μL,引物浓度为10μmol/L时PCR的扩增效率最高.在珠子参中首次建立和优化了以β-actin基因作为内参基因的实时荧光定量PCR体系.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张绍鹏	武汉轻工大学生物与制药工程学院	16	23	2.0	4.0
2	张莹	武汉轻工大学生物与制药工程学院	10	6	2.0	2.0
3	左天	武汉轻工大学生物与制药工程学院	7	1	1.0	1.0
4	张小海	武汉轻工大学生物与制药工程学院	6	1	1.0	1.0
5	罗飞	武汉轻工大学生物与制药工程学院	2	4	1.0	2.0
6	王广	武汉轻工大学生物与制药工程学院	5	3	1.0	1.0