提高源自Bacillus circulans251的β-CGTase对麦芽糖亲和性及其在生产海藻糖中的应用

• 作者: 吴敬 宿玲恰 杜立
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: β-CGTase 易错PCR 分子改造 亲和性 海藻糖转化
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 96-104
• 页数: 9页
• 分类号: Q819
• 语种: 中文
• DOI: 10.13523/j.cb.20190511

摘要

将B.circulans 251 β-CGTase应用于海藻糖制备,海藻糖转化率从50.4％提高至71.9％.为进一步提高底物的转化率,运用易错PCR-高通量筛选技术筛选对以麦芽糖为歧化反应受体的亲和性提高的B.circulans 251 β-CGTase突变体.利用低底物浓度的96孔板4,6-亚乙基-对硝基苯-α-D-麦芽七糖苷(EPS)显色法,最终筛选得到了一株对麦芽糖亲和性提高的突变体M234I.将野生型β-CGTase和突变体酶M234I进行蛋白质纯化,测定其酶学性质.结果 表明,突变体的比活为345.25 U/mg,野生型则为357.63 U/mg;突变体M234I对麦芽糖的Km为0.258 2mmoL/L,仅为野生型(0.474 9mmo]/L)的54.4％,对麦芽糖的亲和性显著提高;突变体的最适温度、最适pH较野生型未发生较大变化.以麦芽糊精(DE值16)为底物,将突变体M234I用于多酶复配体系生产海藻糖,酶反应结果表明海藻糖的转化率最高达74.9％,较野生型β-CGTase提高约3％.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴敬	江南大学食品科学与技术国家重点实验室	68	328	7.0	16.0
5	宿玲恰	江南大学食品科学与技术国家重点实验室	25	37	4.0	4.0
14	杜立	江南大学食品科学与技术国家重点实验室	1	0	0.0	0.0