BMP7基因沉默抑制钙盐诱导猪主动脉瓣膜间质细胞成骨分化

• 作者: 安利钦 施琼 皇改改 程瑜 翁亚光 范梦恬
• 来源期刊: 中国生物工程杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 钙化性主动脉瓣膜病 瓣膜间质细胞 骨形态发生蛋白7 成骨分化 RNA干扰
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 63-71
• 页数: 9页
• 分类号: Q819
• 语种: 中文
• DOI: 10.13523/j.cb.20190507

摘要

目的:探究小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)介导的骨形态发生蛋白7(bone morphogenetic protein7,BMP7)基因沉默对钙盐诱导猪主动脉瓣膜间质细胞成骨分化的影响及机制,为钙化性主动脉瓣膜病(calcific aortic valve disease,CAVD)的干预及治疗提供理论依据.方法:非CAVD瓣膜组织(non-CAVD组)取自手术治疗的主动脉夹层患者,CAVD瓣膜组织(CAVD组)取自因钙化性主动脉瓣狭窄而进行主动脉瓣膜置换术的患者,采用免疫组化和Western blot法检测non-CAVD组和CAVD组中BMP7、Runt相关转录因子2(Runx2)的蛋白质表达水平.选取健康家猪处死后即刻于无菌条件下取主动脉瓣叶,采用胶原酶连续消化法分离主动脉瓣膜间质细胞,观察其形态特征,并用免疫荧光染色行表型鉴定.采用脂质体转染法将BMP7-siRNA转染猪主动脉瓣膜间质细胞,采用qPCR和Western blot法验证BMP7表达的变化;利用钙盐培养基诱导细胞成骨分化,建立体外主动脉瓣膜间质细胞钙化模型后,采用ALP染色和茜素红S染色实验分别检测细胞早期及晚期成骨分化能力;采用qPCR和Western blot法分别检测细胞成骨相关基因及蛋白质Runx2、OCN和OPN的表达情况.并用Western blot法检测BMP7下游信号通路中Smad1/5/8的磷酸化水平.结果:BMP7和Runx2蛋白在CAVD组中表达明显高于non-CAVD组.成功分离出原代猪主动脉瓣膜间质细胞,α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及波形蛋白(vimentin)染色阳性,血管性血友病因子(yon willebrand factor,vWF)染色阴性.转染BMP7-siRNA后猪主动脉瓣膜间质细胞中BMP7的mRNA和蛋白质水平均明显下调,早期及晚期成骨分化能力均明显降低.沉默BMP7基因的表达,可下调Runx2、OCN和OPN的基因及蛋白质表达,且磷酸化的Smad1/5/8(p-Smad1/5/8)蛋白水平明显降低.结论:BMP7基因沉默抑制钙盐诱导的主动脉瓣膜间质细胞的成骨分化能力,BMP7/Smads信号通路可能在该过程中发挥重要作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	翁亚光	重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室	71	300	10.0	14.0
2	施琼	重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室	34	36	3.0	4.0
3	安利钦	重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室	4	0	0.0	0.0
4	程瑜	重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室	6	17	1.0	4.0
5	范梦恬	重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室	8	7	2.0	2.0
6	皇改改	重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室	2	0	0.0	0.0