PCV3Cap基因在昆虫杆状病毒中的表达与鉴定

• 作者: 姜宇航 宋利娜 徐一鸣 李昌 杜寿文 许汪 郝鹏飞 金宁一 陈竞
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪圆环病毒3型 重组杆状病毒 Cap蛋白 表达
• 年，卷（期）: 2019,（11）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 2112-2117,2128
• 页数: 7页
• 分类号: S852.65
• 语种: 中文
• DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.11.03

摘要

试验旨在获得具有天然构象且反应原性良好的猪圆环病毒3型(porcine circoviurs 3,PCV3) Cap蛋白.以本实验室保存的PCV3 Cap基因为模板,设计不同引物扩增Cap基因,将其亚克隆至pEASY-Blunt载体上,验证正确后将目的基因分别克隆至杆状病毒表达栽体pFastBacTM上(含有双启动子),获得含有2个PCV3 Cap基因的重组质粒pFBD-P2C.将该重组质粒转化大肠杆菌DH10-BacTM感受态细胞当中,进行蓝白斑筛选,获得重组杆状质粒BacmidP2C,利用脂质体转染至SF9细胞中进行病毒拯救,转染后72 h,收取上清病毒液,盲传3代,收取SF9细胞应用间接免疫荧光法(IFA)及Western blot检测目的蛋白是否表达.结果 显示,重组质粒pFBD-P2C酶切验证正确,重组杆粒Bacmid P2C构建成功,杆状病毒中能够表达PCV3 Cap蛋白且能与His-tag抗体发生特异性反应,IFA鉴定出现特异性绿色荧光,表明成功表达了PCV3 Cap蛋白且具有反应原性,为深入开展PCV3抗体制备、新型疫苗研发奠定了基础.