2型猪链球菌葡萄糖胺-6-磷酸脱氨酶基因的克隆表达及酶活性测定

• 作者: 丁晨曦 王长军 胡丹 艾乐乐 诸葛尧尧 钱思彤 龚秀芳
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 2型猪链球菌 葡萄糖胺-6-磷酸脱氨酶 原核表达 酶活性
• 年，卷（期）: 2019,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 175-180
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 字数: 4429字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2019.02.006

摘要

目的:克隆表达2型猪链球菌葡萄糖胺-6-磷酸脱氨酶(NagB)编码基因,并测定其酶反应体系活性.方法:根据2型猪链球菌05ZYH33基因组序列,全合成nagB基因(ssu05_0195),并将其克隆至pET32a载体,在大肠杆菌中表达;利用Ni亲和层析柱纯化表达产物,获得纯化的NagB蛋白,Western印迹鉴定后测定其酶反应体系活性.结果:在大肠杆菌中高效表达了nagB基因,重组NagB相对分子质量约为56×103;在25℃、pH9.5、底物浓度为15 mmol/L、反应40 min时,NagB酶促反应体系表现出最大活性;在最适条件下,2型猪链球菌中NagB酶促反应体系的体外活性为3.73 U/mL,酶比活为12.43 U/mg.结论:2型猪链球菌05ZYH33中含有编码NagB的nagB基因,在原核系统中表达的NagB蛋白具有酶学活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	钱思彤		2	0	0.0	0.0
2	龚秀芳		1	0	0.0	0.0
3	丁晨曦		1	0	0.0	0.0
4	胡丹		1	0	0.0	0.0
5	艾乐乐		1	0	0.0	0.0
6	诸葛尧尧		1	0	0.0	0.0
7	王长军		1	0	0.0	0.0