产吡咯喹啉醌的生丝微菌内参基因的筛选和验证

• 作者: 任洋 刘孟粟 夏华平 柯崇榕 钟璐芳 高敏 黄建忠
• 来源期刊: 福建农业科技
• 学科: 生物学
• 关键词: 吡咯喹啉醌 生丝微菌 内参基因 实时荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2019,（11）
• 所属期刊栏目: 微生物特约专栏
• 页码范围: 8-16
• 页数: 9页
• 分类号: Q93
• 字数: 4250字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13651/j.cnki.fjnykj.2019.11.002

摘要

筛选生丝微菌表达调控研究中最适合的内参基因,为后续大幅度提高吡咯喹啉醌(PQQ)产量打下基础.利用实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,RT-qPCR)技术分析生丝微菌基因组中6个候选内参基因的相对表达情况,通过Best-keeper、geNorm和Norm-Finder软件分析,评价各个生长时期候选内参基因的表达稳定性,确定最合适的内参基因.结果表明:通过对生丝微菌4个不同生长时期的6个候选内参基因(16S rRNA、gapdh、recA、ldh、rpoB和S5)的转录情况进行分析和评估,6个候选内参基因均表现出较强的稳定性和特异性,依据3款软件的综合评价,确定gap dh、recA这两个内参基因在两株菌株不同时期均能稳定表达.从6个候选内参基因中筛选出两个表达稳定的内参基因gap dh基因和recA基因,用于后续生丝微菌的基因表达调控研究.