重组人脂蛋白相关磷脂酶A2的原核表达及单克隆抗体制备

• 作者: 朱之炜 欧兰香 王佳颖 王岩 解光宁 陈振
• 来源期刊: 国际检验医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 脂蛋白磷脂酶A2 原核表达 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2019,（22）
• 所属期刊栏目: 论著·基础研究
• 页码范围: 2703-2707
• 页数: 5页
• 分类号: Q556|R446.1
• 字数: 4110字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-4130.2019.22.004

摘要

目的 构建重组人脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)的原核表达质粒,制备重组人Lp-PLA2,并通过免疫诱导获得人Lp-PLA2的单克隆抗体.方法 以人cDNA文库为模板,通过PCR的方法获得PLA2G7基因的编码区序列,并与原核表达载体pET32a进行连接,构建原核表达质粒,转化大肠杆菌Rostta(DE3).通过在30℃0.2 mmol/L异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)条件下诱导蛋白表达,经过纯化获得重组人Lp-PLA2;免疫Balb/c小鼠,制备单克隆抗体;并通过酶联免疫吸附试验法测定效价,检测抗体特异性.结果 通过NotⅠ和SalⅠ双酶切及测序证实原核表达质粒构建成功;经纯化得到47×103左右的蛋白,与Lp-PLA2抗体进行蛋白免疫印迹法杂交呈阳性,表明已得到重组人Lp-PLA2.通过对小鼠免疫,最终获得单克隆抗体,效价为1:2×106,与纤维蛋白原、C-反应蛋白无交叉反应.结论 成功获得重组人Lp-PLA2,并制备得到了效价较高的单克隆抗体,为后续Lp-PLA2检测试剂盒的开发奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈振		2	0	0.0	0.0
2	欧兰香		1	0	0.0	0.0
6	王佳颖		1	0	0.0	0.0
7	解光宁		1	0	0.0	0.0
11	王岩		1	0	0.0	0.0