猪圆环病毒2型Cap蛋白多克隆抗体的制备及鉴定

• 作者: 代军飞 张杰 张欣明 李潇 欧云文 邓辉祥 马炳
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 猪圆环病毒2型 Cap蛋白 多克隆抗体 鉴定
• 年，卷（期）: 2019,（8）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 226-231
• 页数: 6页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2019-0205

摘要

旨在制备猪圆环病毒2型(PCV2)Cap蛋白的多克隆抗体.以PCV2毒株(CAU0673)DNA为模板进行PCR,扩增目的片段大小约为702 bp,构建pET30a-PCV2-Cap重组质粒,转入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达;对目的蛋白进行Ni-NTA树脂亲和层析纯化、复性,并进行SDS-PAGE和Western blot鉴定;将纯化后的重组Cap蛋白与弗氏佐剂混匀乳化,经背部皮下多点注射4次,免疫新西兰大耳白兔,制备成兔抗Cap蛋白多克隆抗体,采用Western blot和间接免疫荧光试验(IFA)验证兔抗血清特异性,并用间接ELISA测定抗血清抗体效价.PCR、双酶切和测序鉴定结果表明,重组质粒pET30a-PCV2-Cap构建正确;重组Cap蛋白以包涵体的形式表达,大小约为34 kD,复性后重组Cap蛋白可与PCV2阳性猪血清发生特异性反应;制备的多克隆抗体与PCV2重组Cap蛋白和全病毒抗原均可发生反应,ELISA抗体效价>1:12800,显著高于商品化疫苗组.