松江鲈白介素15(TfIL-15)的结构特征与重组表达

• 作者: 于珊珊 刘莹莹 林啸鹏 柴迎梅 祝茜
• 来源期刊: 渔业科学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 松江鲈 白介素15(IL-15) 克隆 基因表达 重组蛋白表达
• 年，卷（期）: 2019,（4）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 95-103
• 页数: 9页
• 分类号: Q78|S917
• 字数: 6403字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19663/j.issn2095-9869.20180625001

摘要

为研究白介素15(Interleukin-15,IL-15)在松江鲈(Trachidermus fasciatus Heckel)先天免疫中的功能,本研究利用RACE技术克隆得到松江鲈IL-15基因(命名为TfIL-15)的全长cDNA序列,其长度为1140 bp,包括5’-非编码区(5’-UTR) 165 bp、开放阅读框(ORF) 522 bp和3'UTR 453 bp.在5'UTR区域,存在4个读码框外的AUG翻译起始位点.基因ORF编码173个氨基酸(aa),其中,前59 aa为信号肽序列.成熟肽全长为114 aa,预测分子量为12.975kDa,理论等电点为5.15.同源比对发现,鱼类IL-15变异程度较高,TfIL-15与其他鱼类IL-15同源性在23％～61％之间.多序列比对和三维结构构建结果显示,TfIL-15具有典型4个α螺旋二级结构,形成二硫键的4个半胱氨酸高度保守.qRT-PCR分析表明,TfIL-15广泛表达于松江鲈各组织中.腹腔注射脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)后,TfIL-15 mRNA在血液、皮肤、肝脏和脾脏中均上调表达.在皮肤和血液中,刺激后2h表达量迅速上调至最高峰,分别为对照组的74倍和41倍.脾脏和肝脏在刺激后12h分别达到对照组的3倍和18倍.肝脏中,刺激后96 h,表达量再次上调至对照组的86倍.上述结果表明,TfIL-15可能参与了松江鲈抵抗外界刺激的先天免疫过程.另外,通过构建TfIL-15成熟肽的原核表达载体,成功获得重组蛋白,为进一步研究TilL-15蛋白的功能奠定了基础.