基于重组IBDV VP3蛋白的免疫磁珠间接ELISA抗体检测方法的建立及初步应用

• 作者: 乔薪瑗 于淑媛 周晗 唐丽杰 姜艳平 崔文 徐义刚 李一经 王丽 王书博 龚如月
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 免疫磁珠间接ELISA IBDV抗体检测 IBDV VP3蛋白 毕赤酵母表达系统
• 年，卷（期）: 2019,（6）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 678-686
• 页数: 9页
• 分类号: S852.659.4
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2019.0088

摘要

本研究旨在毕赤酵母中表达鸡传染性法氏囊病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)的VP3蛋白,以重组VP3蛋白作为包被抗原建立IBDV血清抗体免疫磁珠间接ELISA检测方法并进行初步应用.利用毕赤酵母表达系统获得约为39 ku的重组VP3蛋白,Western-blotting检测表明,重组VP3蛋白具有良好的特异性和反应原性.免疫磁珠间接ELISA的最佳反应条件:磁珠和抗原偶联的缓冲液是50 mmol/L MES(pH 8.0),偶联时间为3h,抗原加入量为95μg,抗原与羧基磁珠最大偶联量为80 μg.待检血清和酶标二抗的稀释度分别为1∶1 600和1∶4 000,血清孵育时间为30 min,酶标二抗孵育时间为20 min.在该优化条件下,阴性、阳性临界值判定标准为0.134.特异性试验显示,对抗AIV、IBV、MDV、NDV阳性血清检测结果均为阴性.敏感性试验显示,本试验所建立的检测方法敏感性高于商品化IBDV血清抗体检测试剂盒.重复性试验显示,批内和批间重复试验的最大变异系数分别为3.8％和5.9％.稳定性试验结果显示变异系数小于7％.用建立的检测方法和商品化IBDV血清抗体检测试剂盒同时检测50份血清,结果显示两种检测方法的相对敏感性为94.6％,相对特异性为92.3％,符合率为94.0％.本试验建立的检测方法具有敏感性高、特异性强、重复性好、稳定性高特点,为其应用于临床IBDV血清抗体的检测奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李一经		219	1679	20.0	27.0
2	唐丽杰		90	615	13.0	20.0
3	乔薪瑗		54	297	9.0	14.0
4	王丽		40	257	9.0	15.0
5	姜艳平		51	283	10.0	15.0
6	崔文		49	148	7.0	9.0
7	徐义刚		33	245	10.0	14.0
8	王书博		3	0	0.0	0.0
9	周晗		6	2	1.0	1.0
10	龚如月		1	0	0.0	0.0
11	于淑媛		1	0	0.0	0.0