细粒棘球绦虫EgM123蛋白融合霍乱毒素B亚单位疫苗的构建表达及免疫原性研究

• 作者: 何黎 况玲 张文宝 李军 王甜 郑雪婷 郭宝平 齐文静
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 细粒棘球绦虫 CTB-EgM123 重组蛋白 疫苗 犬
• 年，卷（期）: 2019,（7）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 647-654
• 页数: 8页
• 分类号: R382.5
• 字数: 6620字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2019.00.087

摘要

目的 构建和表达细粒棘球绦虫成虫特异表达EgM123基因与霍乱毒素B的融合蛋白(CTB-EgM123);并确定CTB-EgM123蛋白的抗原性.方法 将合成EgM123基因序列连接到pET28a/CTB原核表达载体中,并转化至大肠杆菌BL21中.利用IPTG诱导目的基因的表达;用SDS-PAGE及Western-Blotting对表达蛋白进行分析和鉴定;用纯化蛋白免疫小鼠及犬,用ELISA方法对小鼠及犬的血清抗体效价和肠黏液的抗体亚类进行分析.结果 PCR和测序确定CTB-EgM123基因片段长度为804 bp,pET28a/CTB-EgM123原核表达阅读框序列正确.在37℃条件下,经IPTG 0.4 mmol/L诱导5h,获得CTB-EgM123高表达的包涵体蛋白,分子质量为37 kDa.免疫小鼠结果表明复性CTB-EgM123蛋白具较好免疫原性,抗体效价＞320 000;以IgG2a为主.检测免疫犬血清效价,结果发现用融合蛋白免疫后的犬血清抗体效价＞64 000,效价高于EgM123免疫组(t=0.0064,P＜0.05);且在4周时,抗体呈上升趋势,并能较长时间维持抗体水平.结论 原核表达载体pET28a/CTB-EgM123在大肠杆菌中成功表达,纯化蛋白接种小鼠和犬表明具有高的抗原性.表明CTB可以增强蛋白的免疫原性,并刺激小鼠和犬体内产生高水平的体液和黏膜免疫.本研究为研发犬用包虫病疫苗奠定了基础.