人源抗狂犬病病毒单克隆抗体的构建及验证

• 作者: 南建军 安晨 房世娣 毛晓燕 赵晓瑞 陈继军
• 来源期刊: 微生物学免疫学进展
• 学科: 医学
• 关键词: 狂犬病病毒 单克隆抗体 噬菌体抗体库 快速荧光灶抑制试验
• 年，卷（期）: 2019,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 7-13
• 页数: 7页
• 分类号: R392
• 字数: 3941字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13309/j.cnki.pmi.2019.04.002

摘要

目的 利用人源抗狂犬病病毒ScFv噬菌体抗体库,构建单克隆抗体(单抗)轻、重链质粒,瞬时表达,纯化后验证具有高中和活性的单抗.方法 以从ScFv噬菌体抗体库中筛选获得特异性抗体为模板,PCR扩增抗体轻、重链可变区序列,构建人源全分子抗体瞬时转染质粒;轻、重链质粒混合后转染HEK293 EBNA1细胞,瞬时表达全分子抗体.采用Mabselect SuRe介质手动亲和纯化抗体,Nano Vue超微量分光光度计测定蛋白质的质量浓度,快速荧光灶抑制试验(rapid fluorescent focus inhibition test,RFFIT)进行体外中和效价验证.结果 成功构建22个轻链质粒,15个重链质粒.通过真核细胞瞬时表达后,经手动亲和纯化后,获得22株单抗.除1株抗体外,其余21株抗体的蛋白质量浓度均>300μg/mL;部分抗体纯度均在90％以上.中和活性结果显示,5株在1500～1800 IU/mg之间;8株在800～1500 IU/mg之间;7株在500～800 IU/mg之间;其余2株在500 IU/mg以下.结论 成功构建并验证获得20株中和活性>500 IU/mg的人源抗狂犬病病毒单抗,为单抗混合制剂的研究奠定了基础.