蓝舌病毒NS2蛋白的抗体制备及鉴定

• 作者: Darien Kheder Ali Mohamed 康棣 张国芮 殷宏 独军政 田占成 薛慧文 郭艳妮 高闪电
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 蓝舌病毒 NS2蛋白 多克隆抗体 鉴定
• 年，卷（期）: 2019,（2）
• 所属期刊栏目: 病毒
• 页码范围: 12-18
• 页数: 7页
• 分类号: S852.659.4
• 字数: 4865字
• 语种: 中文

摘要

本研究参考GenBank中蓝舌病毒16型(Bluetongue virus serotype 16,BTV-16)标准株RSAvvvv的序列,人工合成编码BTV-16 NS2蛋白的S8基因,将其亚克隆至原核表达载体pPRoEx-HTb中,构建重组表达质粒pPro-NS2,并转化大肠杆菌BL21进行IPTG诱导表达,并进行可溶性分析.SDS-PAGE结果显示,表达的rNS2蛋白主要以包涵体的形式存在于菌体中.利用组氨酸标签纯化树脂获得了高纯度的NS2蛋白,免疫新西兰白兔制备抗NS2蛋白的多克隆抗体.Western blot结果显示,制备的抗NS2蛋白多克隆抗体不仅可与重组表达的rNS2蛋白反应,而且可与BTV感染细胞后的天然NS2蛋白反应.间接免疫荧光结果显示,该抗体也可与BTV感染C6/36细胞中的天然NS2蛋白反应,且发现NS2大量分布于C6/36细胞的胞质中.本研究所制备的NS2蛋白的多克隆抗体具有很好的反应性和特异性,为进一步研究NS2蛋白的功能奠定了基础.