鼠肺炎沙眼衣原体质粒蛋白pgp5的克隆表达鉴定及免疫原性分析

• 作者: 刘全忠 刘原君 孔杰 孙毅娜 张颖 胡春敏 陈曼 齐蔓莉
• 来源期刊: 中国皮肤性病学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 鼠肺炎沙眼衣原体 pgp5蛋白 质粒 基因表达 免疫原性
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 518-523
• 页数: 6页
• 分类号: R751|R374
• 语种: 中文
• DOI: 10.13735/j.cjdv.1001-7089.201807185

摘要

目的 获取鼠肺炎沙眼衣原体(Chlamydia muridarum)质粒蛋白pgp5的基因及纯化的蛋白并鉴定其免疫原性.方法 设计引物,PCR扩增目的基因,将其定向插入到原核表达载体pET28a中,然后将重组质粒转化入大肠杆菌E.coli DH5α中,并用PCR扩增及序列测定等方法对重组质粒进行鉴定.再将重组质粒转化入感受肽Rosetta(DE3)并诱导表达,用镍柱纯化pgp5-his融合蛋白.用纯化后的目的蛋白免疫新西兰家兔,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定抗体效价,Western blot、细胞免疫荧光方法检测抗体与pgp5蛋白的结合.结果 所获得的pgp5基因片段经测序长度为795 bp,检索确认其序列与GeneBank一致.十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹实验均显示获得相对分子质量约29 000的纯化蛋白.ELISA检测多克隆抗体效价达1∶100 000.细胞免疫荧光检测结果显示抗体可与体外培养的鼠肺炎沙眼衣原体特异性结合.结论 成功表达pgp5-his融合蛋白,并制备了高效价、高特异性的抗pgp5抗体,为进一步研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘原君		65	208	7.0	9.0
2	刘全忠		170	703	11.0	17.0
3	张颖		178	510	11.0	16.0
4	齐蔓莉		45	177	7.0	10.0
5	孙毅娜		28	297	8.0	17.0
6	陈曼		2	5	1.0	2.0
7	孔杰		8	15	3.0	3.0
8	胡春敏		1	0	0.0	0.0