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鼠肺炎沙眼衣原体质粒蛋白pgp5的克隆表达鉴定及免疫原性分析
鼠肺炎沙眼衣原体质粒蛋白pgp5的克隆表达鉴定及免疫原性分析
作者:
刘全忠
刘原君
孔杰
孙毅娜
张颖
胡春敏
陈曼
齐蔓莉
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
鼠肺炎沙眼衣原体
pgp5蛋白
质粒
基因表达
免疫原性
摘要:
目的 获取鼠肺炎沙眼衣原体(Chlamydia muridarum)质粒蛋白pgp5的基因及纯化的蛋白并鉴定其免疫原性.方法 设计引物,PCR扩增目的基因,将其定向插入到原核表达载体pET28a中,然后将重组质粒转化入大肠杆菌E.coli DH5α中,并用PCR扩增及序列测定等方法对重组质粒进行鉴定.再将重组质粒转化入感受肽Rosetta(DE3)并诱导表达,用镍柱纯化pgp5-his融合蛋白.用纯化后的目的蛋白免疫新西兰家兔,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定抗体效价,Western blot、细胞免疫荧光方法检测抗体与pgp5蛋白的结合.结果 所获得的pgp5基因片段经测序长度为795 bp,检索确认其序列与GeneBank一致.十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹实验均显示获得相对分子质量约29 000的纯化蛋白.ELISA检测多克隆抗体效价达1∶100 000.细胞免疫荧光检测结果显示抗体可与体外培养的鼠肺炎沙眼衣原体特异性结合.结论 成功表达pgp5-his融合蛋白,并制备了高效价、高特异性的抗pgp5抗体,为进一步研究奠定了基础.
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篇名
鼠肺炎沙眼衣原体质粒蛋白pgp5的克隆表达鉴定及免疫原性分析
来源期刊
中国皮肤性病学杂志
学科
医学
关键词
鼠肺炎沙眼衣原体
pgp5蛋白
质粒
基因表达
免疫原性
年,卷(期)
2019,(5)
所属期刊栏目
论著
研究方向
页码范围
518-523
页数
6页
分类号
R751|R374
字数
语种
中文
DOI
10.13735/j.cjdv.1001-7089.201807185
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作者信息
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刘原君
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刘全忠
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张颖
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齐蔓莉
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孔杰
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期刊影响力
中国皮肤性病学杂志
主办单位:
西安交通大学
出版周期:
月刊
ISSN:
1001-7089
CN:
61-1197/R
开本:
大16开
出版地:
陕西省西安市西五路157号
邮发代号:
52-17
创刊时间:
1987
语种:
chi
出版文献量(篇)
9358
总下载数(次)
21
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