评价一种新CYP2C9突变型对药物代谢的影响

• 作者: 亢奋恒 张博文 戴大鹏 李传宝 蔡剑平
• 来源期刊: 医学研究杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 细胞色素P2C9 新突变体 体外研究
• 年，卷（期）: 2019,（6）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 54-59
• 页数: 6页
• 分类号: R394
• 字数: 4227字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11969/j.issn.1673-548X.2019.06.013

摘要

目的 在体外表达细胞色素P2C9(32T＞ C),构建酶促反应体系,检测其对甲苯磺丁脲(tolbutamide)的代谢活性.方法 利用定向诱变技术,以细胞色素P2C9野生型的互补DNA为反义链,获得细胞色素P2C9*3以及细胞色素P2C9(32T＞C)的complementary DNA,利用杆状病毒穿梭载体bacmid抽提试剂盒获得bacmid,转染伪黏虫卵巢细胞,充分表达后提取微粒体蛋白质,并用免疫印迹法检测其表达量.在体外条件下,测定各型细胞色素P2C9催化甲苯磺丁脲代谢的最大反应速率Vm和米氏常数Km,评价新突变体的催化功能.结果 利用昆虫表达系统表达获得细胞色素P2C9 * 1、细胞色素P2C9*3和细胞色素P2C9(32T＞ C)3种微粒体蛋白质.免疫印迹结果显示,新变异型蛋白表达水平接近于野生型.体外代谢实验结果显示,细胞色素P2C9(32T＞ C)针对甲苯磺丁脲的体外清除率(Vm/Km)明显低于野生型,体外酶学活性为野生型的12.40％.结论 在体外条件下,细胞色素P2C9(32T＞ C)对甲苯磺丁脲的代谢活性明显下降,提示携带有该基因型的患者服用细胞色素P2 C9的底物药时,体内代谢速率可能会有不同程度的降低,用药前需考虑调整剂量.