基于四环素调控系统构建白蛋白启动子调控大鼠uPA转基因表达的慢病毒载体

• 作者: 刘宇 廉梅 张晟 林晓琳 肖东 黎海燕
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 白蛋白启动子 大鼠尿激酶 桡足类绿色荧光蛋白 四环素调控系统 慢病毒载体
• 年，卷（期）: 2019,（8）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 29-33
• 页数: 5页
• 分类号: S858.91|Q789
• 字数: 2927字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-5038.2019.08.006

摘要

基于四环素调控系统构建白蛋白(albumin,Alb)启动子调控大鼠uPA(urokinase-type plas-minogen activator,ruPA)转基因肝特异性过表达的慢病毒载体pLVX-Alb-TetOne-TRE-ruPA-T2A-CopG-FP(pLATTRUTG).以CTG0875-2-11质粒为模板,PCR扩增大鼠的uPA(ruPA)基因,3'端添加Flag标签,In-Fusion克隆至pLVX-Alb-TetOne-TRE-T2A-CopGFP(pLATTTG)质粒中,得到慢病毒载体pLVX-Alb-TetOne-TRE-ruPA-T2A-CopGFP(pLATTRUTG),所构建质粒经测序和酶切鉴定.将pLATTRUTG瞬时转染293T细胞,转染后24 h倒置荧光显微镜检测CopGFP表达;接着向6孔细胞培养板内加入强力霉素(Doxycycline,Dox),48 h后在倒置荧光显微镜下观察CopGFP表达(包括未加Dox的孔),随后收集细胞以提取总RNA和总蛋白,用于RT-qPCR检测ruPA及报告基因表达和Western blot检测标签蛋白Flag表达.酶切和测序确证我们成功构建了慢病毒载体pLATTRUTG;瞬转293T细胞后,24 h倒置荧光显微镜下可见零星细胞(约占0.1％)发弱的绿色荧光,加Dox 48 h后所有细胞展现强的绿色荧光,而不加Dox的孔内仍然只见到零星细胞(约占0.1％)发弱的绿色荧光.RT-qPCR和Western blot检测结果显示,与不加Dox的细胞相比,加Dox的细胞中ruPA、报告基因CopGFP和Flag表达水平显著升高.结果提示,成功基于四环素调控系统构建Alb启动子调控大鼠uPA转基因表达的慢病毒载体pLATTRUTG,为相关后续实验奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	肖东	南方医科大学基础医学院肿瘤研究所	29	117	5.0	10.0
5	张晟	南方医科大学基础医学院细胞生物学教研室	27	289	12.0	16.0
6	林晓琳	南方医科大学基础医学院肿瘤研究所	10	13	2.0	3.0
7	刘宇	南方医科大学实验动物中心	8	28	3.0	5.0
8	黎海燕	南方医科大学实验动物中心	2	1	1.0	1.0
9	廉梅	南方医科大学实验动物中心	3	1	1.0	1.0