太平洋牡蛎防御素在毕赤酵母中的重组表达及其抑菌活性

• 作者: 崔旭 张亚莉 王强厚 陶妍 颜倩倩
• 来源期刊: 生物工程学报
• 关键词: 太平洋牡蛎 防御素 毕赤酵母 重组表达 抑菌活性
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 海洋生物技术
• 页码范围: 91-101
• 页数: 11页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13345/j.cjb.180119

摘要

防御素是一类富含精氨酸和半胱氨酸的内源性阳离子抗菌肽,是软体动物抵御各种病原微生物侵染的重要免疫因子.太平洋牡蛎防御素(Crassostrea gigas defensin,CgD)近羧基端的43个氨基酸残基构成了其成熟肽区域,决定了CgD的生物学活性.首先通过逆转录PCR和设计特异性引物从太平洋牡蛎外套膜中分离并扩增到3'端添加和不添加6×His标签的两种目的基因CgDH+和CgDH-;与pPICZαA连接后构建的重组表达载体(pPICZαA-CgDH+和pPICZαA-CgDH-)电转至毕赤酵母Pichia pastoris X-33中,使用1.0％甲醇诱导表达目的蛋白CgDH+和CgDH-,最适培养条件为29℃、250 r/min、72 h;通过固化金属离子亲和层析(IMAC)获得分子量为5.78 kDa的纯化的重组蛋白CgDH+,根据其蛋白质浓度推算表达量为2.32 mg/Lo经MALDI-TOF-TOF质谱分析证明纯化产物即为预期的目的蛋白.抑菌试验结果显示分别含重组蛋白CgDH+和重组蛋白CgDH-的培养液上清对金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus和铜绿假单孢菌Pseudomonas aeruginosa都具有抑菌活性,表明重组蛋白中6×His标签的存在与否并不影响其生物学活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陶妍	上海海洋大学食品学院上海水产品加工及贮藏工程技术研究中心	34	379	6.0	19.0
2	张亚莉	上海海洋大学食品学院上海水产品加工及贮藏工程技术研究中心	3	5	2.0	2.0
3	王强厚	上海海洋大学食品学院上海水产品加工及贮藏工程技术研究中心	3	9	2.0	3.0
4	崔旭	上海海洋大学食品学院上海水产品加工及贮藏工程技术研究中心	3	9	2.0	3.0
5	颜倩倩	上海海洋大学食品学院上海水产品加工及贮藏工程技术研究中心	2	4	2.0	2.0